（1.大理学院，云南 大理 671000；2.大理药业，云南 大理 671000）

香樟 Cinnamomun camphora（L.）Presl为亚热带常绿阔叶乔木，是生产龙脑的主要原料之一。右旋龙脑原名“龙脑香”，又名龙脑，天然冰片，为香樟的树脂和挥发油中取得的结晶，主产于印度尼西亚、苏门答腊等地，我国均系进口。近年来，江西省吉安地区林业科学研究所从樟科植物香樟中，优选出枝叶部分挥发油的主要成分为右旋龙脑的龙脑型香樟树，利用其枝、叶经水蒸气蒸馏萃取的精油，进一步升华，制得右旋龙脑。右旋龙脑含量较高的部位为叶。对植物枝叶、果实精油的分离分析，目前大都采用水蒸气蒸馏法，该法较为稳定，但缺点是费时，对热不稳定药物破坏大且要消耗大量的有机溶剂。超临界CO2萃取技术具有步骤简单、选择分离效果好、萃取率高、产物无溶剂残留、有利于热敏性物质的萃取等优点，已广泛应用于香料及中草药成分的萃取。现就云南香樟叶中的右旋龙脑用超临界CO2萃取工艺进行优化，为进一步开发利用云南香樟叶资源奠定一定的基础。

1、材料

香樟叶（采自大理学院旁的绿化树，由本校生药教研室夏从龙副教授鉴定为C. camphora），HA221-50-06型超临界萃取装置（江苏华安科技有限公司），7890A型气相色谱仪（Agilent），右旋龙脑对照品（中国药品生物制品检定所，批号110881-200803）。

2、方法与结果

2.1、右旋龙脑含量测定    右旋龙脑含量测定方法及条件参照2010年版《中国药典》一部“天然冰片（右旋龙脑）”项下进行。

2.2、超临界CO2萃取云南香樟叶中右旋龙脑工艺参数优化    原料采摘后在阴凉通风处放置10d，除去一定水分，优选工艺的原料为当年长出9月份的绿叶。把香樟叶药材剪细，称取200g，装入萃取釜中，对萃取釜、解离釜Ⅰ、解离釜Ⅱ进行加热，当达到所选定的温度时，开启CO2瓶，通过高压泵对系统加压，当萃取釜、解压釜Ⅰ、解压釜Ⅱ压力分别达到所设定的压力时，调节CO2的流量到一定量，保持恒温恒压。当达到所选定的萃取时间后，从解压釜Ⅰ和解压釜Ⅱ出料口出料，分别收集保存，将挥发油放入分液漏斗中，加入5mL乙酸乙酯等定容至25mL，用气相进行含量测定。通过查阅文献及预试验，固定萃取时间为2h，设计L9（34）优选压力、温度及流量对超临界CO2萃取云南香樟叶中右旋龙脑的影响。萃取率为萃取出的右旋龙脑的量与药材的量的比值。因素水平表见表1，正交试验结果见表2，方差分析见表3。

由表2可知，各因素对云南香樟叶中右旋龙脑萃取率的影响次序为A>C>B，较好的萃取方案为A3B2C3。由表3可见，压力（A）和流量（C）对右旋龙脑的得率有显著影响。因此，最佳的萃取工艺优选为萃取压力30MPa，温度为45℃，二氧化碳流量20L·h-1。

2.3、萃取时间优选    照上优选出的工艺条件，选择不同的萃取时间（0.5，1.0，1.5，2.0，2.5h）进行合理萃取时间的研究，结果萃取率依次为0.167%，0.336%，1.038%，0.041%，0.027%。因此选择萃取时间为1.5h。

2.4、工艺验证实验    为了验证工艺的稳定性，重复较佳工艺5次，右旋龙脑萃取率分别为1.352%，1.421%，1.436%，1.467%，1.445%。RSD2.74%，说明工艺稳定。

2.5、水蒸气蒸馏法提取云南香樟中的右旋龙脑    取采于9月份的香樟叶药材，放置10d自然干燥，剪细，称取200g，放入3000mL圆底烧瓶中，加入水1600mL，缓慢加热至沸腾并保持微沸4h，停止加热，放置0.5h，开启测定器下端的活塞，将水缓慢放出，使油层下降到上段栓与0刻度齐平，读取挥发油量为2.3mL，将挥发油放入分液漏斗中，加入5mL乙酸乙酯萃取，保留上层液，用乙酸乙酯定容至25mL，再取出1mL，用乙酸乙酯定容至25mL，进行气相测定含量，结果水蒸气蒸馏法右旋龙脑的提取率为0.823%（n=3）。超临界CO2萃取率明显高于水蒸气蒸馏法，因此选择超临界CO2为云南香樟中右旋龙脑的较佳萃取方法。

3、讨论

何洪城等研究发现新鲜枝叶采集后不宜立即加工，而是放置10d左右的时间后再加工得率较高。新鲜叶子加工后，其粗品中含其他油份较多，造成后期分离困难，提高了生产成本，降低了经济效益。超临界CO2在较低温度下进行，对易挥发的组分或生理活性物质破坏较小；而且具有操作简单，过程短，萃取效率高，无有机溶剂残留，不污染环境等优点。           欧阳少林等研究发现香樟叶含精油一般为1.53%~1.93%，其中右旋龙脑含量为81.78%，相当于香樟叶中含右旋龙脑为1.25%~1.58%，而9月份采摘的云南香樟叶中右旋龙脑的含量为1.43%，与文献报道的含量类似，云南香樟资源丰富，采摘一定量的树叶也不影响绿化，为云南产香樟树叶资源的利用提供一定的参考。